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在選擇ABI_7500熒光定量PCR儀時(shí)需要考慮哪些問題?
更新時(shí)間:2022-05-27   點(diǎn)擊次數(shù):1634次
     ABI_7500熒光定量PCR儀操作方便、運(yùn)行速度快、實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確,從不常見設(shè)備變成分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的基礎(chǔ)設(shè)備。隨著PCR技術(shù)的成熟運(yùn)用,多重?cái)U(kuò)增越來越熱鬧,熒光定量PCR儀也不能幸免。該儀器發(fā)展到如今各個(gè)廠家都推出4通道、5通道甚至6通道熒光定量PCR儀,眼花繚亂的選擇讓人無所適從,就有人一不小心走進(jìn)了“通道越多越好”的誤區(qū)。
  
  在使用有些廠家5通道的熒光定量儀時(shí),為了確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的精確性和準(zhǔn)確性都要在實(shí)驗(yàn)中使用ROX(一種熒光染料)或?qū)S玫腞eferencedye,這些熒光染料都必須單獨(dú)使用一個(gè)檢測(cè)通道。這樣以來,真正能檢測(cè)多重PCR熒光信號(hào)的有效通道只有4個(gè),而且使用校正染料可能會(huì)增加后期的使用成本。有的熒光定量PCR的檢測(cè)通道是只為自已廠家的專用的熒光染料或試劑開放的,有效檢測(cè)通道也絕非像宣傳資料中宣稱的那么多。在購買前確認(rèn)熒光定量PCR儀器的有效檢測(cè)通道尤為重要,不能單單只聽宣傳。
  
  考慮多重ABI_7500熒光定量PCR儀的通道數(shù)的時(shí)候也應(yīng)該從實(shí)驗(yàn)室實(shí)際情況出發(fā),多重PCR并非人人適用、人人可用,因?yàn)槎嘀豍CR必須要對(duì)退火溫度進(jìn)行優(yōu)化,在引物設(shè)計(jì)的時(shí)候就可能開始考慮能不能放在一個(gè)反應(yīng)體系內(nèi)進(jìn)行反應(yīng),不同的反應(yīng)需要的退火溫度不同,不合適的退火溫度會(huì)降低擴(kuò)增效率,放大非特異性擴(kuò)增,甚至擴(kuò)增不出來,它使實(shí)驗(yàn)指數(shù)倍的復(fù)雜化了。臨床上因?yàn)橛性噭S家專門針對(duì)某些疾病開發(fā)研制的多重檢測(cè)試劑盒,才需要用到3、4、5通道的檢測(cè);科研用的熒光定量因?yàn)樵O(shè)計(jì)探針麻煩,基本上都用染料法,基本上單通道就能滿足。
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